منتجات
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Detection Kit لـ 2019-nCoV
الاستخدام المتوقع
تستخدم هذه المجموعة في الكشف النوعي عن فيروس كورونا المستجد (2019-nCoV) باستخدام مسحات الحلق ومسحات البلعوم الأنفي وسائل غسل القصبات الهوائية والبلغم. دليل على التشخيص والعلاج السريري: يوصى بإجراء تحليل شامل للحالة بالاقتران مع المظاهر السريرية للمريض والاختبارات المعملية الأخرى.
مبدأ التفتيش
تعتمد المجموعة على تقنية RT- PCR بخطوة واحدة.في الواقع ، تم اختيار جينات ORF1ab و N لفيروس كورونا الجديد 2019 (2019-nCoV) كمناطق مستهدفة للتضخيم.تم تصميم البادئات المحددة والتحقيقات الفلورية (تحقيقات الجينات N تحمل علامة FAM و ORF1ab تحمل علامة HEX) لاكتشاف الحمض النووي الريبي لفيروس كورونا الجديد في العينات لعام 2019.تشتمل المجموعة أيضًا على نظام كشف داخلي للرقابة الداخلية (مسبار جيني للتحكم الداخلي يحمل علامة CY5) لمراقبة عملية جمع العينات وتضخيم RNA و PCR ، وبالتالي تقليل النتائج السلبية الخاطئة.
المكونات الرئيسية
| عناصر | مقدار（48T / كيت） |
| حل رد فعل RT-PCR | 96 ميكرولتر |
| nCOV التمهيدي TaqMan probemixture ORF1ab ، N Gene ، RnaseP Gene） | 864 ميكرولتر |
| سيطرة سلبية | 1500 ميكرولتر |
| تأثير إيجابي nCOV （l ORF1ab N Gene | 1500 ميكرولتر |
الكواشف الخاصة: استخراج الحمض النووي الريبي أو كواشف التنقية.التحكم السلبي / الإيجابي: التحكم الإيجابي هو RNA الذي يحتوي على الجزء المستهدف ، بينما التحكم السلبي هو الماء الخالي من الأحماض النووية.أثناء الاستخدام ، يجب أن يشاركوا في الاستخراج ويجب اعتبارهم معديين.يجب التعامل معها والتخلص منها وفقًا للوائح ذات الصلة.
الجين المرجعي الداخلي هو جين RnaseP البشري.
شروط التخزين وتاريخ انتهاء الصلاحية
-20 ± 5 ، تجنب التجميد المتكرر والذوبان أكثر من 5 مرات ، صالحة لمدة 6 أشهر.
أداة قابلة للتطبيق
مع FAM / HEX / CY5 وغيرها من أجهزة PCR الفلورية متعددة القنوات.
متطلبات العينة
1.أنواع العينات المطبقة: مسحات الحلق ، مسحات البلعوم الأنفي ، سائل غسيل القصبات الهوائية ، البلغم。
2-جمع العينات (تقنية التعقيم）
مسحة البلعوم: امسح اللوزتين والجدار البلعومي الخلفي بمسحتين في نفس الوقت ، ثم اغمر رأس المسحة في أنبوب اختبار يحتوي على محلول أخذ العينات
البلغم: بعد أن يعاني المريض من سعال عميق ، قم بتجميع البلغم المصاب بالسعال في أنبوب اختبار ذو غطاء لولبي يحتوي على محلول أخذ العينات ؛سائل غسيل القصبات الهوائية ： أخذ العينات من قبل المهنيين الطبيين.3- تخزين العينات ونقلها
يجب اختبار عينات عزل الفيروس واختبار الحمض النووي الريبي في أسرع وقت ممكن.يمكن تخزين العينات التي يمكن الكشف عنها في غضون 24 ساعة في 4 ℃ ؛تلك التي لا يمكن اكتشافها خلال 24
يجب تخزين الساعات عند -70 ℃ أو أقل (إذا لم تكن هناك ظروف تخزين تبلغ -70 ℃ ، فيجب أن تكون كذلك
يتم تخزينها مؤقتًا في الثلاجة -20 درجة مئوية).يجب أن تتجنب العينات التجميد والذوبان المتكرر أثناء النقل.يجب إرسال العينات إلى المختبر في أقرب وقت ممكن بعد جمعها.إذا دعت الحاجة إلى نقل العينات لمسافات طويلة ، يوصى بتخزين الثلج الجاف.
طرق الاختبار
1 معالجة العينات واستخراج الحمض النووي الريبي (منطقة معالجة العينات)
يوصى بأخذ 200 ميكرولتر من العينة السائلة لاستخراج الحمض النووي الريبي.لخطوات الاستخراج ذات الصلة ، راجع تعليمات مجموعات استخراج الحمض النووي الريبي التجارية.كلاهما سلبي وسلبي
ضوابط في هذه المجموعة كانت متورطة في الاستخراج.
2 تحضير كاشف PCR (منطقة تحضير الكاشف)
2.1 قم بإزالة جميع المكونات من المجموعة وذوبان الجليد وخلطها في درجة حرارة الغرفة.الطرد المركزي عند 8000 دورة في الدقيقة لبضع ثوان قبل الاستخدام ؛احسب الكمية المطلوبة من الكواشف ، ويتم تحضير نظام التفاعل كما هو موضح في الجدول التالي:
| عناصر | خدمة N (نظام 25 ميكرولتر) |
| nCOV التمهيدي خليط TaqMan | 18 ميكرولتر × ن |
| حل رد فعل RT-PCR | 2 ميكرولتر × ن |
| * N = عدد العينات المختبرة + 1 (تحكم سلبي) + 1 (nCOVمراقبة إيجابية) | |
2.2 بعد خلط المكونات تمامًا ، يتم استخدام أجهزة الطرد المركزي لفترة قصيرة للسماح لكل السائل الموجود على جدار الأنبوب بالسقوط إلى أسفل الأنبوب ، ثم قسمة نظام التضخيم 20 ميكرولتر في أنبوب PCR.
3 أخذ العينات (منطقة تحضير العينة)
أضف 5 مايكرولتر من الضوابط السلبية والإيجابية بعد الاستخراج.يضاف الحمض النووي الريبي للعينة المراد اختبارها إلى أنبوب تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.
قم بتغطية الأنبوب بإحكام وجهاز الطرد المركزي عند 8000 دورة في الدقيقة لبضع ثوانٍ قبل نقله إلى منطقة كشف التضخيم.
4 تضخيم PCR (منطقة الكشف المكبرة)
4.1 ضع أنبوب التفاعل في خلية العينة بالجهاز ، واضبط المعلمات على النحو التالي:
| منصة | دورة رقم | درجة حرارة(درجة مئوية) | وقت | مجموعةموقع |
| يعكسالنسخ | 1 | 42 | 10 دقائق | - |
| ما قبل تغيير الطبيعةn | 1 | 95 | 1 دقيقة | - |
| دورة | 45 | 95 | 15 ثانية | - |
| 60 | 30 ثانية | جمع البيانات |
اختيار قناة كشف الجهاز: حدد قناة FAM - HEX - CY5 لإشارة التألق.للإشارة إلى الفلورسنت NONE ، يرجى عدم اختيار ROX.
5 تحليل النتائج (يرجى الرجوع إلى التعليمات التجريبية لكل أداة للإعداد)
بعد رد الفعل ، احفظ النتائج.بعد التحليل ، اضبط قيمة البداية ، وقيمة النهاية ، وقيمة العتبة لخط الأساس وفقًا للصورة (يمكن للمستخدم الضبط وفقًا للوضع الفعلي ، ويمكن ضبط قيمة البداية على 3 ~ 15 ، ويمكن ضبط القيمة النهائية على 5 ~ 20 ، تعديل) في الرسم البياني اللوغاريتمي عند عتبة النافذة ، يكون خط العتبة في الطور اللوغاريتمي ، ويكون منحنى تضخيم عنصر التحكم السالب خطًا مستقيمًا أو أسفل خط العتبة).
6 التحكم Quauty （يتم تضمين التحكم الإجرائي في الاختبار التحكم السلبي: لا يوجد منحنى تضخيم واضح لقنوات الكشف FAM و HEX و CY5 n
التحكم الإيجابي لـ COV: منحنى التضخيم الواضح لقنوات الكشف FAM و HEX ، قيمة Ct 32 ، ولكن لا يوجد منحنى تضخيم لقناة CY5 ؛
يجب استيفاء المتطلبات المذكورة أعلاه بشكل متزامن في نفس التجربة ؛وإلا فإن التجربة غير صالحة وتحتاج إلى التكرار.
7 تحديد النتائج.
7.1 إذا لم يكن هناك منحنى تضخيم أو قيمة Ct> 40 في قنوات FAM و HEX لعينة الاختبار ، وكان هناك منحنى تضخيم في قناة CY5 ، فيمكن الحكم على أنه لا يوجد فيروس كورونا جديد 2019 (2019-nCoV) الحمض النووي الريبي في العينة ؛
.2 إذا كانت عينة الاختبار تحتوي على منحنيات تضخيم واضحة في قناتي FAM و HEX ، وكانت قيمة Ct 40 ، فيمكن الحكم على أن العينة إيجابية لفيروس كورونا الجديد 2019 (2019-nCoV).
7.3 إذا كانت عينة الاختبار تحتوي على منحنى تضخيم واضح في قناة واحدة فقط من FAM أو HEX ، وكانت قيمة Ct هي 40 ، ولا يوجد منحنى تضخيم في القناة الأخرى ، فيجب إعادة اختبار النتائج.إذا كانت نتائج إعادة الاختبار متسقة ، فيمكن الحكم على العينة بأنها إيجابية بالنسبة للعينة الجديدة
فيروس كورونا 2019 (2019-nCoV).إذا كانت نتيجة إعادة الاختبار سلبية ، فيمكن الحكم على أن العينة سلبية بالنسبة لفيروس كورونا الجديد 2019 (2019-nCoV).
قيمة الحكم الإيجابي
تُستخدم طريقة منحنى ROC لتحديد القيمة المرجعية لـ CT للمجموعة والقيمة المرجعية للرقابة الداخلية هي 40.
تفسير نتائج الاختبار
1. يجب اختبار كل تجربة من أجل الضوابط السلبية والإيجابية.يمكن تحديد نتائج الاختبار فقط عندما تفي الضوابط بمتطلبات مراقبة الجودة
2 عندما تكون قناتا اكتشاف FAM و HEX موجبة ، قد تكون النتيجة من قناة CY5 (قناة التحكم الداخلي) سلبية بسبب منافسة النظام.
3- عندما تكون نتيجة المراقبة الداخلية سلبية ، إذا كانت قنوات الكشف عن FAM و HEX لأنبوب الاختبار سلبية أيضًا ، فهذا يعني أن النظام معطل أو العملية خاطئة ، والاختبار غير صالح.لذلك ، يجب إعادة اختبار العينات.
