منتجات
مجموعة أدوات الكشف عن Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR لـ 2019-nCoV
الاستخدام المتوقع
تُستخدم هذه المجموعة للكشف النوعي عن فيروس كورونا الجديد (2019-nCoV) باستخدام مسحات الحلق ومسحات البلعوم الأنفي وسائل غسل القصبات الهوائية والبلغم. نتيجة الكشف عن هذا المنتج هي للمرجع السريري فقط، ولا ينبغي استخدامه كأداة وحيدة أدلة للتشخيص والعلاج السريري. يوصى بإجراء تحليل شامل للحالة بالاشتراك مع المظاهر السريرية للمريض والاختبارات المعملية الأخرى.
مبدأ التفتيش
تعتمد المجموعة على تقنية RT-PCR ذات الخطوة الواحدة.في الواقع، تم اختيار جينات ORF1ab وN لفيروس كورونا الجديد (2019-nCoV) كمناطق مستهدفة للتضخيم.تم تصميم الاشعال المحددة وتحقيقات الفلورسنت (تسمى مجسات الجينات N بـ FAM ومسابير ORF1ab بـ HEX) لاكتشاف النوع الجديد من الحمض النووي الريبي (RNA) لفيروس كورونا في العينات.تشتمل المجموعة أيضًا على نظام كشف التحكم الداخلي الداخلي (مسبار جين التحكم الداخلي المسمى بـ CY5) لمراقبة عملية جمع العينات وتضخيم الحمض النووي الريبي (RNA) وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وبالتالي تقليل النتائج السلبية الكاذبة.
المكونات الرئيسية
| عناصر | مقدار(48T/كيت) |
| حل رد فعل RT-PCR | 96 ميكرولتر |
| التمهيدي لـ nCOV، خليط مسبار TaqMan (ORF1ab، N Gene، RnaseP Gene) | 864 ميكرولتر |
| سيطرة سلبية | 1500 ميكرولتر |
| التحكم الإيجابي لـ nCOV (جين ORF1ab N) | 1500 ميكرولتر |
الكواشف الخاصة: استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) أو كواشف التنقية.التحكم السلبي/الإيجابي: التحكم الإيجابي هو الحمض النووي الريبي الذي يحتوي على الجزء المستهدف، في حين أن التحكم السلبي هو الماء الخالي من الأحماض النووية.أثناء الاستخدام، يجب أن تشارك في عملية الاستخراج ويجب اعتبارها معدية.ويجب التعامل معها والتخلص منها وفقًا للوائح ذات الصلة.
الجين المرجعي الداخلي هو جين RnaseP البشري.
شروط التخزين وتاريخ انتهاء الصلاحية
-20 ± 5 درجة مئوية، تجنب تكرار التجميد والذوبان أكثر من 5 مرات، صالح لمدة 6 أشهر.
أداة قابلة للتطبيق
مع FAM / HEX / CY5 وغيرها من أدوات PCR الفلورية متعددة القنوات.
متطلبات العينة
1. أنواع العينات القابلة للتطبيق: مسحات الحلق، مسحات البلعوم الأنفي، سائل غسل القصبات الهوائية، البلغم.
2. جمع العينات (تقنية التعقيم)
مسحة البلعوم: تمسح اللوزتين وجدار البلعوم الخلفي بمسحتين في نفس الوقت، ثم يغمر رأس المسحة في أنبوب اختبار يحتوي على محلول أخذ العينات
البلغم: بعد أن يعاني المريض من سعال عميق، قم بجمع البلغم السعال في أنبوب اختبار ذو غطاء لولبي يحتوي على محلول أخذ العينات؛سائل غسل القصبات الهوائية: أخذ العينات من قبل المتخصصين الطبيين.3. تخزين ونقل العينات
وينبغي اختبار عينات عزل الفيروس واختبار الحمض النووي الريبي (RNA) في أسرع وقت ممكن.يمكن تخزين العينات التي يمكن اكتشافها خلال 24 ساعة في درجة حرارة 4 درجات مئوية؛تلك التي لا يمكن اكتشافها خلال 24
يجب تخزين الساعات عند -70 درجة مئوية أو أقل (إذا لم تكن هناك ظروف تخزين تبلغ -70 درجة مئوية، فيجب أن تكون كذلك
مخزنة مؤقتًا في الثلاجة -20 درجة مئوية).يجب أن تتجنب العينات تكرار التجميد والذوبان أثناء النقل.يجب إرسال العينات إلى المختبر في أقرب وقت ممكن بعد جمعها.إذا كانت هناك حاجة إلى نقل العينات لمسافات طويلة، فمن المستحسن تخزين الثلج الجاف.
طرق الاختبار
1 معالجة العينات واستخراج الحمض النووي الريبي (منطقة معالجة العينات)
يوصى بأخذ 200 ميكرولتر من العينة السائلة لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA).للتعرف على خطوات الاستخراج ذات الصلة، راجع تعليمات مجموعات استخراج الحمض النووي الريبي التجارية.كلا السلبية والسلبية
شاركت الضوابط في هذه المجموعة في الاستخراج.
2 تحضير كاشف PCR (منطقة تحضير الكاشف)
2.1 قم بإزالة جميع المكونات من المجموعة وقم بإذابتها واخلطها في درجة حرارة الغرفة.الطرد المركزي بسرعة 8000 دورة في الدقيقة لبضع ثوان قبل الاستخدام؛حساب الكمية المطلوبة من الكواشف، ويتم تحضير نظام التفاعل كما هو موضح في الجدول التالي:
| عناصر | حصة N (نظام 25 ميكرولتر) |
| خليط مسبار TaqMan التمهيدي لـ nCOV | 18 ميكرولتر × ن |
| حل رد فعل RT-PCR | 2 ميكرولتر × ن |
| *N = عدد العينات التي تم اختبارها + 1 (تحكم سلبي) + 1 (nCOVمراقبة إيجابية) | |
2.2 بعد خلط المكونات جيدًا، قم بالطرد المركزي لفترة قصيرة للسماح لجميع السائل الموجود على جدار الأنبوب بالسقوط إلى قاع الأنبوب، ثم قم بتقسيم نظام التضخيم 20 ميكرولتر إلى أنبوب PCR.
3 أخذ العينات (منطقة تحضير العينة)
إضافة 5μl من الضوابط السلبية والإيجابية بعد الاستخراج.تتم إضافة الحمض النووي الريبي (RNA) للعينة المراد اختبارها إلى أنبوب تفاعل PCR.
قم بتغطية الأنبوب بإحكام وأجهزة الطرد المركزي عند 8000 دورة في الدقيقة لبضع ثوان قبل نقله إلى منطقة الكشف عن التضخيم.
4 تضخيم PCR (منطقة الكشف المضخمة)
4.1 ضع أنبوب التفاعل في خلية عينة الجهاز، واضبط المعلمات على النحو التالي:
| منصة | دورة رقم | درجة حرارة(درجة مئوية) | وقت | مجموعةموقع |
| يعكسالنسخ | 1 | 42 | 10 دقائق | - |
| ما قبل تمسخn | 1 | 95 | 1 دقيقة | - |
| دورة | 45 | 95 | 15 ثانية | - |
| 60 | 30 ثانية | جمع البيانات |
اختيار قناة الكشف عن الأجهزة: حدد قناة FAM، HEX، CY5 لإشارة الفلورسنت.للإشارة إلى الفلورسنت NONE، يرجى عدم اختيار ROX.
5 تحليل النتائج (يرجى الرجوع إلى التعليمات التجريبية لكل أداة للإعداد)
بعد رد الفعل، حفظ النتائج.بعد التحليل، اضبط قيمة البداية وقيمة النهاية وقيمة العتبة لخط الأساس وفقًا للصورة (يمكن للمستخدم التعديل وفقًا للوضع الفعلي، ويمكن ضبط قيمة البداية على 3 ~ 15، ويمكن ضبط قيمة النهاية على 5 ~ 20، تعديل) في الرسم البياني اللوغاريتمي عند عتبة النافذة، يكون خط العتبة في المرحلة اللوغاريتمية، ويكون منحنى التضخيم للتحكم السلبي خطًا مستقيمًا أو أسفل خط العتبة).
6 التحكم في الجودة (يتم تضمين التحكم الإجرائي في الاختبار) التحكم السلبي: لا يوجد منحنى تضخيم واضح لقنوات الكشف FAM وHEX وCY5
التحكم الإيجابي في COV: منحنى تضخيم واضح لقنوات الكشف FAM وHEX، قيمة Ct ≥32، ولكن لا يوجد منحنى تضخيم لقناة CY5؛
يجب تلبية المتطلبات المذكورة أعلاه في وقت واحد في نفس التجربة؛وإلا فإن التجربة غير صالحة وتحتاج إلى التكرار.
7 تحديد النتائج.
7.1 إذا لم يكن هناك منحنى تضخيم أو قيمة Ct> 40 في قنوات FAM وHEX لعينة الاختبار، وكان هناك منحنى تضخيم في قناة CY5، فيمكن الحكم على عدم وجود فيروس كورونا جديد لعام 2019 (2019-nCoV) الحمض النووي الريبي في العينة؛
.2 إذا كانت عينة الاختبار تحتوي على منحنيات تضخيم واضحة في قنوات FAM وHEX، وكانت قيمة Ct ≥40، فيمكن الحكم على أن العينة إيجابية لفيروس كورونا الجديد لعام 2019 (2019-nCoV).
7.3 إذا كانت عينة الاختبار تحتوي على منحنى تضخيم واضح فقط في قناة واحدة من FAM أو HEX، وكانت قيمة Ct ≥40، ولا يوجد منحنى تضخيم في القناة الأخرى، فيجب إعادة اختبار النتائج.إذا كانت نتائج إعادة الاختبار متسقة، فيمكن الحكم على العينة بأنها إيجابية للجديدة
فيروس كورونا 2019 (2019-nCoV).إذا كانت نتيجة إعادة الاختبار سلبية، فيمكن الحكم على أن العينة سلبية لفيروس كورونا الجديد 2019 (2019-nCoV).
قيمة الحكم الإيجابي
يتم استخدام طريقة منحنى ROC لتحديد قيمة CT المرجعية للمجموعة والقيمة المرجعية للتحكم الداخلي هي 40.
تفسير نتائج الاختبار
1. يجب اختبار كل تجربة للضوابط السلبية والإيجابية.لا يمكن تحديد نتائج الاختبار إلا عندما تلبي الضوابط متطلبات مراقبة الجودة
2. عندما تكون قنوات الكشف FAM وHEX إيجابية، قد تكون النتيجة من قناة CY5 (قناة التحكم الداخلية) سلبية بسبب منافسة النظام.
3. عندما تكون نتيجة التحكم الداخلي سلبية، إذا كانت قنوات الكشف FAM وHEX لأنبوب الاختبار سلبية أيضًا، فهذا يعني أن النظام معطل أو أن العملية خاطئة، ويكون الاختبار غير صالح.ولذلك، يجب إعادة اختبار العينات.
